Proteinas I (ensayos de reconocimiento de proteínas):
Comprobamos existencia de proteínas (mediante reactivo de Biuret) y aminoácidos o grupos de estos (mediante reacción xantoproteica) en distintas soluciones: solución de ovoalbúmina; solución con glicina y solución de Aspartamo.
¿Cuál fué nuestro objetivo?
Materiales, sustancias y reactivos utilizados:
Materiales: _
Dializador
_ Vaso de vidrio
_ Mechero
_ Soporte
_Gradilla
_ Tubos de ensayo
_Pinza para tubo de ensayo
Sustancias y
reactivos:
_ Solución de ovoalbúmina
_ Nitrato de plata
_Solución de
gelatina sin sabor
_Reactivo de biuret
_ Acido nítrico
_ Hidróxido de sodio al 10%
_ Etanol
_acido clorhídrico
¿Qué reactivos usamos?
En los ensayos uno y dos usamos el reactivo de Biuret, este es
capaz de detectar la presencia de proteínas, péptidos cortos y demás compuestos
con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de dudosa composición.
El reactivo está compuesto por hidróxido de sodio y sulfato
cúprico.
En estos ensayos lo utilizamos para identificar la presencia de
proteínas en las distintas sustancias; cómo señal de su presencia la sustancia
en contacto con el reactivo de Biuret tomaba una tinción de color violeta, y en
el caso de que no hubiese presencia de estas( en caso de que de negativo) se tornaba de color celeste.
En los ensayos número uno y dos usamos la reacción Xantoprotéica, es un método que
se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. Está compuesta por ácido nítrico concentrado.
En este ensayo la usamos para reconocer los
grupos de aminoácidos presentes en la proteína. Ya que la reacción da positiva
en caso de que existan aminoácidos en la sustancia; si esto sucede toma una tinción amarilla y si
no sucede (da como resultado negativo) se torna de color celeste.
¿Cómo funcionan los distintos reactivos?
El Reactivo de Biuret, detecta la presencia de proteínas,
péptidos cortos y demás compuestos con dos o más enlaces peptídicos en
sustancias de dudosa composición.
El reactivo está compuesto por hidróxido de sodio y sulfato cúprico. Cómo señal de presencia de proteínas
la sustancia en contacto con el reactivo de Biuret toma una tinción de color
violeta, y en el caso de que no hubiese presencia de estas( en caso de que de negativo) se tornaba
de color celeste.
La Reacción Xantoprotéica (HNO3) , se utiliza para
determinar la cantidad de proteína soluble en una solución. Y también para reconocer grupos de
aminoácidos presentes en una sustancia. Está
compuesta por ácido nítrico concentrado.
La utilizamos de forma de que si daba resultado
positivo ( tomaba tinción amarilla) había grupos de
aminoácidos en la sustancia; y si quedaba celeste daba resultado negativo( no
había aminoácidos presentes en la sustancia).
Desarrollo de los distintos procesos:
Solución de Aspartamo:
1. Disolvimos una pastilla de Aspartamo
(Aspartil) en 6 cm3 de
agua.
2. Extraemos de la anterior solución 2 cm3 y agregamos reactivo de biuret (preparado nuevamente).
3. Agitamos y observamos.
La solución tomó un color celeste; por lo que dió resultado
negativo; o sea que no hay presencia de proteínas en la solución de
Aspartamo.
4. Se le agregó HNO3 a 2cm3 de solución de Aspartamo.
5. Agitamos y observamos.
6. Calentamos la mezcla y agregamos hidróxido de
sodio al 10% y observamos.
Solución con glicina:
1. Colocamos en un tubo de ensayo 2 cm3
2. Agregamos una punta de espátula de glicina
solida, agitamos.
3. Agregamos reactivo de biuret (recientemente preparado).
4. Agitamos y observamos.
Se torna de color celeste; da resultado negativo por lo que podemos
decir que no hay presencia de proteínas en la solución con glicina.
5. Colocamos en un tubo de ensayo 2 cm3 de solución con glicina.
6. Agregamos HNO3; agitamos y observamos
7. Calentamos y agregamos hidróxido de sodio al 10.
8. Observamos.
Tomó un color celeste; dio resultado negativo; por lo que no
hay presencia de aminoácidos.
¿ Hubo errores que afectaran a los resultados finales de cada ensayo?
No hubo errores sistemáticos o asistemáticos que influyeran en el
preparado y resultado final. Solo algunos errores tecnicos pero de todas
maneras no influyeron en el resultado.
Proteinas II: (Diálisis)
En esta parte del práctico el objetivo era comprobar si las proteínas traspasaban las membranas del dializador.
Sustancias, reactivos y materiales utilizados:
Materiales: _ Dializador
_ vaso de bohemia
_ tubos de ensayo
Sustancias: _
ovoalbúmina
_ Nitrato de plata
_ gelatina
_ NaOH al 10%
_ CuSO4 al 1 %
Solución de ovoalbúmina:
1. Colocamos en el vaso del dializador, agua destilada hasta 1/3 de éste.
2. En el recipiente interior colocamos la
solución de ovoalbúmina.
3. Dejamos reposar 30 minutos
4. Realizamos Reactivo de Biuret (3 gotas de solución de hidróxido de sodio al 10% y 2 gotas de solución de sulfato cúprico al 0.1%; agitamos).
5. Colocamos en un tubo de ensayo 2cm3 de solución de ovoalbúmina y agregamos Reactivo de Biuret.
6.Agitamos y observamos.
La solución de tornó color violeta por lo que pudimos decir que dio resultado positivo; de esto deducimos que en la solución
de ovoalbúmina hay proteínas presentes.
1. A una muestra de solución de ovoalbúmina
agregamos HNO3 agitamos y observamos.
La solución se volvió de color amarilla por lo que decimos que dio
resultado positivo con reacción xantoproteica; deducimos de esto que hay presencia
de aminoácidos o grupos de aminoácidos en la solución de ovoalbúmina.
¿Qué pudimos comprobar?
Con esto pudimos comprobar que las proteínas en la solución de
ovoalbúmina dentro del dializador no lograron pasar la membrana de este.
